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培養(yǎng)基與試劑相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)解讀
  • 發(fā)布日期:2018-04-16      瀏覽次數(shù):3207
    •     中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會2013年11月29日發(fā)布,2014年6月1日正式實(shí)施的GB 4789.28—2013《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》(以下簡稱2013版標(biāo)準(zhǔn))至今已經(jīng)實(shí)施了3年半[1]。這個標(biāo)準(zhǔn)方法可以說是目前所有食品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)和食品生產(chǎn)企業(yè)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的基礎(chǔ),雖然篇幅大,規(guī)定多,但是,標(biāo)準(zhǔn)各章節(jié)的描述都不夠詳盡,在具體操作細(xì)節(jié)方面更是存在各種疏漏,檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)困惑較多,理解應(yīng)用時也常常出現(xiàn)偏差,影響標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施效果。檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)現(xiàn)場評審時,在培養(yǎng)基和試劑質(zhì)量控制環(huán)節(jié)被開不符合項(xiàng)的情況極為常見。為了幫助檢驗(yàn)人員更好地理解和應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn),我們需要對2013版標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用現(xiàn)狀進(jìn)行分析。

        微生物學(xué)檢驗(yàn)培養(yǎng)基質(zhì)量控制的意義

        目前,作為我國現(xiàn)行食品安全標(biāo)準(zhǔn)體系配套的強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)》(GB 4789系列)都是以傳統(tǒng)微生物學(xué)培養(yǎng)為基礎(chǔ)的經(jīng)典檢驗(yàn)方法。培養(yǎng)基及相關(guān)配套試劑是微生物學(xué)常規(guī)檢驗(yàn)方法必須采用的生化試劑,培養(yǎng)基及試劑質(zhì)量會直接影響到檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,因此,必須做好培養(yǎng)基及試劑的質(zhì)量控制。涉及食品微生物學(xué)檢驗(yàn)的培養(yǎng)基種類繁多。近年來,隨著市場經(jīng)濟(jì)的發(fā)展,商品化培養(yǎng)基的應(yīng)用越來越普及?;诜N種原因,它們的配方、用途、使用方法、保存方式各不相同,為實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制帶來新問題。

        現(xiàn)行的相關(guān)微生物學(xué)檢驗(yàn)用培養(yǎng)基質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)或規(guī)定,除了2013版標(biāo)準(zhǔn)之外,CNAS—CL09:2013《檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物檢測領(lǐng)域的應(yīng)用說明》規(guī)定實(shí)驗(yàn)室對于培養(yǎng)基和試劑的驗(yàn)收可參考ISO 11133—2014《食品、動物飼料和水的微生物學(xué)—營養(yǎng)培養(yǎng)基的制備、生產(chǎn)、存儲和性能測試》或修改采用ISO1 1133制定的SN/T 1538.1—2016《培養(yǎng)基制備指南 第1部分:實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備質(zhì)量保證通則》和SN/T 1538.2—2016《培養(yǎng)基制備指南第2部分:培養(yǎng)基性能測試實(shí)用指南》進(jìn)行[2,3],但是,這些相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)或規(guī)定受限于應(yīng)用領(lǐng)域,作為微生物學(xué)檢驗(yàn)培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量控制依據(jù)也不完備,多數(shù)商品化培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)也未據(jù)此作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),而檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)對自行配制的培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)量控制的情況更少,導(dǎo)致培養(yǎng)基和試劑質(zhì)量參差不齊。據(jù)以往相關(guān)調(diào)查,國產(chǎn)培養(yǎng)基的質(zhì)量均有嚴(yán)重問題[4]。中國國家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督管理委員會通報(bào)的CNAS實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)場評審在《服務(wù)和供應(yīng)品的采購》這個環(huán)節(jié)的常見不符合項(xiàng)zui多,主要是:未建立培養(yǎng)基和試劑質(zhì)量控制程序、不能提供關(guān)鍵培養(yǎng)基技術(shù)性驗(yàn)收評估記錄和不能提供實(shí)驗(yàn)室用水符合性評價記錄,說明多數(shù)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)對于培養(yǎng)基和試劑的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)定的理解、執(zhí)行都存在偏差。

        培養(yǎng)基和試劑質(zhì)量控制的要求

        在中國國家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督管理委員會發(fā)布的《檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定評審準(zhǔn)則》4.5.6條款中,規(guī)定“檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)應(yīng)建立和保持選擇和購買對檢驗(yàn)檢測質(zhì)量有影響的服務(wù)和供應(yīng)品的程序。明確服務(wù)、供應(yīng)品、試劑、消耗材料的購買、驗(yàn)收、存儲的要求”,就是要求“在中華人民共和國境內(nèi),向社會出具具有證明作用的數(shù)據(jù)、結(jié)果的檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)”為保證采購物品和相關(guān)服務(wù)的質(zhì)量,應(yīng)當(dāng)按制定的程序?qū)υ噭┻M(jìn)行有效的控制和管理,以保證檢驗(yàn)檢測結(jié)果的質(zhì)量[5]。雖然文件有規(guī)定,但是,具體如何執(zhí)行,需要檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)結(jié)合自身實(shí)際情況制定程序性文件。2013版標(biāo)準(zhǔn)只是食品安全國家標(biāo)準(zhǔn),適用范圍于食品微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域,而目前其他微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域并沒有適用的培養(yǎng)基和試劑質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),所以,建議所有涉及微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)都執(zhí)行或參照執(zhí)行2013版標(biāo)準(zhǔn),制定適合本實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)基和試劑質(zhì)量控制程序性文件。

        2013版標(biāo)準(zhǔn)的具體要求和存在問題

        術(shù)語和定義

        本章節(jié)主要缺陷是定義描述不到位和前后術(shù)語不一致。同時,遺漏了診斷血清、測試紙片、生化鑒定試劑盒等常用微生物檢驗(yàn)試劑。另外,標(biāo)準(zhǔn)將培養(yǎng)基和試劑分為11類,分類方法與ISO 11133分為6類有所不同,例如,將選擇性計(jì)數(shù)培養(yǎng)基分為選擇性固體計(jì)數(shù)培養(yǎng)基和選擇性液體計(jì)數(shù)培養(yǎng)基,明顯就是畫蛇添足。

        缺少“設(shè)備和儀器”

        作為一個既有檢驗(yàn)方法又有判定依據(jù)的標(biāo)準(zhǔn),缺少對于設(shè)備和儀器的規(guī)定,是不可想象的。

        培養(yǎng)基及試劑質(zhì)量保證

        這個章節(jié)分為證明文件、貯存、培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備、培養(yǎng)基的使用、培養(yǎng)基的棄置五個部分。建議檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)按照這個框架規(guī)定培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量控制程序。這個章節(jié)存在的問題,主要是對培養(yǎng)基保質(zhì)期規(guī)定太松、配制用水電阻率錯誤、pH測定溫度不適用、培養(yǎng)基的棄置可操作性不強(qiáng),而目前現(xiàn)場評審時,實(shí)驗(yàn)室被核查到的常見錯誤,除了培養(yǎng)基配制原始記錄信息不全這個通病外,幾乎所有實(shí)驗(yàn)室都沒有做到“傾注瓊脂量達(dá)到3?mm以上厚度”,屬于未認(rèn)真學(xué)習(xí)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

        質(zhì)控菌株的保藏及使用

        這個章節(jié),除了使用術(shù)語與第二章規(guī)定不一致外,zui重要的問題是描述和規(guī)定不夠詳盡,也未考慮生物安全相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求,因此,與CNAS—CL09:2013、GB 4789.1—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 總則》、GB 19489—2008等其他實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制管理規(guī)定要求不一致[2,6,7],容易理解錯誤。

        培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求

        1.基本要求

        本條規(guī)定供應(yīng)商和制備者應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基和試劑的20℃~25℃的pH和緩沖能力特性評估,前者與標(biāo)準(zhǔn)全文都在25℃測定pH的規(guī)定不符,后者則是全文都沒有出現(xiàn)如何檢驗(yàn)、如何判定的描述。

        2.微生物學(xué)要求

        概論規(guī)定實(shí)驗(yàn)室應(yīng)“制定驗(yàn)收程序,如需進(jìn)行驗(yàn)證,可按6.2執(zhí)行”。對此條款,目前,多數(shù)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)并未理解,除了沒有制定明確的培養(yǎng)基和試劑驗(yàn)收程序外,也不知道哪些培養(yǎng)基和試劑需要進(jìn)行驗(yàn)證。其實(shí),就是有第三方檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)檢驗(yàn)報(bào)告判定“達(dá)到附錄D質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的要求”的,以及對檢驗(yàn)結(jié)果沒有直接影響的培養(yǎng)基和試劑,不需要驗(yàn)證。在“5.2.3.2測試菌株”條,使用了與第四章“質(zhì)控菌株”不一樣的術(shù)語。這個條款中,規(guī)定了根據(jù)培養(yǎng)基和試劑類型的不同,采用的測試菌株數(shù)量。在現(xiàn)場評審時,常見評審員要求實(shí)驗(yàn)室必須使用附錄E里面的全部菌株進(jìn)行測試或?qū)嶒?yàn)室僅用一株菌株進(jìn)行選擇性培養(yǎng)基測試等情況,都屬于對標(biāo)準(zhǔn)理解錯誤。

        培養(yǎng)基和試劑性能測試方法

        總體來說,2016版標(biāo)準(zhǔn)考慮到我國中小型實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行全部培養(yǎng)基和試劑驗(yàn)證的工作量,并未一味照搬標(biāo)準(zhǔn)的要求,人性化規(guī)定了實(shí)驗(yàn)室可以使用半定量和定性測試方法驗(yàn)證培養(yǎng)基和試劑,有利于實(shí)驗(yàn)室執(zhí)行并開展。不足之處是,本章節(jié)文字、語法及描述性錯誤太多,影響了標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施效果。

        測試結(jié)果的記錄

        7.1條要求“培養(yǎng)基制造商或供應(yīng)商應(yīng)按客戶的要求提供培養(yǎng)基常規(guī)信息和相關(guān)測試菌株生長特性信息。”與3.1.1條“生產(chǎn)企業(yè)提供的文件”屬于重復(fù)規(guī)定。

        7.2條要求“按照質(zhì)量體系的要求,對所有培養(yǎng)基性能測試的數(shù)據(jù)歸檔并在有效期內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)?shù)谋4妗?rdquo;實(shí)際上,任何質(zhì)量控制體系都沒有規(guī)定必須對所有培養(yǎng)基進(jìn)行性能測試,用于輔助檢驗(yàn)用的培養(yǎng)基,如,菌種保存、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部環(huán)境監(jiān)控的那些培養(yǎng)基并不強(qiáng)制進(jìn)行性能測試,只要對關(guān)鍵性培養(yǎng)基和試劑進(jìn)行驗(yàn)證即可。

        附錄

        這個部分除了因?yàn)樯婕懊姹容^廣,各種文字錯誤也相當(dāng)多。附錄A的表A.1中,如,“顏色異常”的可能原因中,就缺少了“配制原料錯誤”、“容器污染(如,異常熒光)”這樣的常見問題。附錄B中,除了流程圖有缺陷外,甘油添加量10%~15%明顯太少。附錄C的主要問題是使用的培養(yǎng)基成分名稱與5.1.2條“基礎(chǔ)成分”描述不一致。在附錄D、附錄E中,分別規(guī)定了生產(chǎn)企業(yè)或?qū)嶒?yàn)室自制培養(yǎng)基和實(shí)驗(yàn)室使用商品化培養(yǎng)基的具體質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。其中除了文字錯誤多外,還存在缺少對生理鹽水等常用培養(yǎng)基的規(guī)定、使用生物危害較大的菌株作為試驗(yàn)菌株、用A/A、K/A、K/K描述結(jié)果不符合GB 4789.1—2016規(guī)定、部分培養(yǎng)基不可能達(dá)到評定標(biāo)準(zhǔn)等主要問題。附錄F“螺旋平板法”是6.1.1.3條采用的,但是,其內(nèi)容規(guī)定的全部是樣品檢驗(yàn)方法,并報(bào)告樣品中菌落數(shù),*不適用于培養(yǎng)基的質(zhì)量控制。2013版標(biāo)準(zhǔn)的7.2條“建議使用測試結(jié)果記錄單(見附錄G)進(jìn)行文件記錄并評價測試結(jié)果”。實(shí)際上,附錄G作為原始記錄表格,缺少配制用水、儀器設(shè)備、環(huán)境條件、處理方式、包裝規(guī)格等關(guān)鍵信息,同時,表格中要求進(jìn)行的凝膠穩(wěn)定性、粘稠度等指標(biāo),在2013版標(biāo)準(zhǔn)全文中并沒有提及如何檢驗(yàn)、如何判定,所以,附錄G*不符合實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系要求。

        【參考文獻(xiàn)】

        [1]GB 4789.28—2013.食品安全國家標(biāo)準(zhǔn);食品微生物學(xué)檢驗(yàn);培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求[S].2013;

        [2]CNAS—CL09:2013.檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物檢測領(lǐng)域的應(yīng)用說明[S].2016;

        [3]ISO 11133—2014,Microbiology of food,animal feed and water—Preparation,production,storage and performance testing of culture media[S].2014;

        [4]居建華,顧偉忠,姚積源等.商品培養(yǎng)基使用的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制[J].上海預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志.2000,12(11):515~517;

        [5]國家認(rèn)監(jiān)委關(guān)于印發(fā)《檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定評審準(zhǔn)則》及釋義和《檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定評審員管理要求》的通知(2016-06-02)[2018-01-30];

        http://www.cnca.gov.cn/xxgk/gx/2016/201606/t20160602_51598.shtml;

        [6]GB 4789.1—2016.食品安全國家標(biāo)準(zhǔn),食品微生物學(xué)檢驗(yàn),總則[S].2016;

        [7]GB 19489—2008.實(shí)驗(yàn)室,生物安全通用要求[S].2008;

         (內(nèi)容源于福建省疾病預(yù)防控制中心

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