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GC毛細色譜柱五大進樣方式
  • 發(fā)布日期:2018-09-11      瀏覽次數(shù):3412
    • 大口徑毛細管柱的直接進樣

      內(nèi)徑≥0.53mm的毛細管柱稱為大口徑毛細管柱,由于其內(nèi)徑比一般毛細管粗,柱的樣品容量為填充柱的1/10~1/20,介于填充柱和常規(guī)毛細管柱之間,柱內(nèi)載氣流速可高達10~20mL/min,因此只需將氣化室的內(nèi)襯管和柱接頭稍加改進,就可采用填充柱的進樣口直接進樣。  

       

      分流進樣

      它是毛細管氣相色譜的進樣方式,注入樣品后大部分樣品被放空,僅有約1/100的樣品進入毛細管柱,分流比可在1/20~1/200的范圍調(diào)節(jié)。適用于大部分氣體或液體樣品的分析,尤其對未知樣品使用分流進樣,可保護毛細管柱不被沾污,防止柱效降低。

       

      分流進樣方式,由總流量閥控制載氣的總流量,載氣進入氣化室分成兩路,一路作為隔墊吹掃氣,流量僅為1~3mL/min。另一路進入氣化室與氣化的樣品蒸氣混合后再分為兩部分,其中大部分經(jīng)分流口放空,僅小部分進入毛細管柱。若載氣總流量為104mL/min,隔墊吹掃氣設置為3mL/min,則101mL/min進入氣化室,當分流流量為100mL/min時,柱內(nèi)流量僅為1 mL/min,此時分流比為1/100。應看到此氣路設計將柱前壓調(diào)節(jié)閥安裝在分流氣路上,在載氣總流量不變的情況下,提高柱前壓,使柱流速增大,可加快分析速度;若保持柱前壓不變,通過調(diào)節(jié)總流量閥可改變分流比,即總流量愈大,分流比也愈大。

       

      分流進樣時,氣化室的內(nèi)襯管如圖所示,其大部分都不是直通式,管內(nèi)有縮徑處或裝有燒結(jié)板,在縮口處放置有玻璃珠或硅烷化玻璃毛,以增大與樣品接觸的面積,保證樣品*氣化。填充物應位于襯管的中間溫度高處,也是注射器針尖所達到處,可減少分流歧視。

       

      分流歧視是指在一定分流比的條件下,由于樣品中不同組分的沸點差異,而造成它們的實際分流比是不同的,因而會造成進入毛細管柱的樣品組成不同于原始樣品的組成,從而影響定量分析的準確度。消除分流歧視的方法是在柱容量允許的條件下,依據(jù)樣品濃度盡量采用小的分流比,并盡量使樣品快速氣化。

       

      不分流進樣

      當分流進樣不能滿足對分析靈敏度的要求,或分析含有大量溶劑的樣品中痕量組分時,才使用不分流進樣技術(shù)。

       

      為消除溶劑效應可采用瞬間不分流技術(shù),即當進樣開始時關(guān)閉分流電磁閥,使系統(tǒng)處于不分流狀態(tài),如圖所示,此時進入系統(tǒng)的載氣,僅為進入毛細管柱和隔墊清掃所需的載氣量(3~5mL/min),然后向氣化室注入2~3uL樣品,經(jīng)30~80s,待大部分氣化樣品開始進入毛細管柱,立即開啟分流電磁閥,使系統(tǒng)處于分流狀態(tài)。此時存留在氣化室的大部分溶劑氣體(顯然也包括約5%的樣品組分)很快從分流口放空,從而明顯地消除了溶劑拖尾,使分流狀態(tài)一直保持到分析結(jié)束,就可將原來被掩蓋在溶劑拖尾峰中的組分分離出來。

       

      由上述可知不分流進樣不是不分流,而是一種將瞬間不分流與大部分時間分流相組合的進樣方式。為獲得準確的分析結(jié)果,如何確定瞬間不分流的時間間隔,就成為操作的關(guān)鍵。依據(jù)大多數(shù)文獻報道,此時間間隔多采用0.75min,就能保證95%的樣品進入色譜柱。此時間間隔也可自行測定,方法為:先設置一個長的時間間隔,如120s,以保證全部樣品組分都進入色譜柱,分析后從譜圖上找到緊挨拖尾溶劑峰后的一個被*分離的色譜峰作測定標志,測出該峰的峰面積值,它就代表100%的樣品進入了色譜柱。然后逐步縮短不分流時間間隔,如100s、80s、60s、40s,分別進樣分析,再計算標志色譜峰的峰面積與次分析時的峰面積比值,直到此值達到≥0.95,即為瞬間不分流的時間間隔,如圖所示。

       

      一般地講,使用高沸點溶劑比低沸點溶劑有利,因為溶劑沸點高時,容易實現(xiàn)溶劑聚焦,且可使用較高的色譜柱初始溫度,還可降低注射器針尖歧視以及氣化室的壓力突變。表1中列出了常見的溶劑及其沸點和實現(xiàn)溶劑聚焦宜采用的色譜柱初始溫度。

       

      對高沸點樣品,不分流時間間隔長一些有利于提高分析靈敏度,而不影響測定準確度;對低沸點樣品,則盡可能采用短的不分流時間間隔,以便既能大限度消除溶劑拖尾,又可保證分析的準確度。

       

      使用不分流進樣時,樣品進入毛細管柱的量比分流進樣多,并利用了溶劑效應(又稱溶劑聚焦),使與溶劑揮發(fā)性相接近的微量組分被濃縮在尚未揮發(fā)的溶劑中,從而獲得微量組分的狹窄譜帶并提高了分離度,還可提高檢測的靈敏度和定量測定結(jié)果的準確度。

       

      應當指出,溶劑效應的正確應用會受到氣化室溫度,毛細管柱柱箱溫度,進樣量和樣品中溶劑沸點的制約,它是在氣化室溫度、柱箱溫度皆低于溶劑沸點20~25℃的條件下產(chǎn)生的。當氣化后溶劑樣品混合物大量進入色譜柱頭時,大量低沸點的溶劑會在柱入口內(nèi)壁短期凝聚一層越來越厚的溶劑液膜(df),起臨時固定液的作用,因而會造成毛細管柱的相比β值大幅下降,但溶質(zhì)的分配系數(shù)Kp保持恒定,因此會隨溶劑液膜df的加厚,使樣品中所有組分的容量因子k大大增加。

       

      這樣使進樣后的樣品組分的譜帶前沿,總是在一個越來越厚的混合固定液液膜上移動,而樣品譜帶的后部則是在一個相對較薄的液膜(主要是固定液的液膜)上移動,結(jié)果使樣品譜帶的前沿移動得慢,而譜帶后部移動得快,從而使每個組分的譜帶被壓縮而變窄,呈現(xiàn)出溶劑聚焦的效應。

       

      另一方面,溶劑的極性一定要與樣品的極性相匹配,且要保證溶劑在所有被測樣品組分之前出峰,否則早流出的峰就會被溶劑的大峰掩蓋。同時,溶劑還要與固定相匹配,才能實現(xiàn)有效的溶劑聚焦。不分流進樣也是分析高沸點痕量組分的方法。

       

      當采用不分流進樣方式時,氣化室溫度設置可比分流進樣時稍低一些,以使樣品在氣化室滯留時間長一些,氣化速度稍慢一些。但此溫度下限應能保證待測組分在瞬間不分流時間間隔內(nèi)能*氣化。進樣后應盡量采用程序升溫方式操作,以保證溶劑聚焦的良好結(jié)果。進樣量不宜超過2~3uL,應采用容積大的內(nèi)襯管,否則會產(chǎn)生樣品倒灌;進樣速度應快些,進樣速度的重現(xiàn)性會影響分析結(jié)果的重復性。

       

      冷柱頭進樣

      對受熱不穩(wěn)定的樣品,可將其直接注入處于室溫或更低溫度下的毛細管柱柱頭。此時氣化室的結(jié)構(gòu)特點如圖所示:無加熱裝置,但有冷空氣或制冷劑(液態(tài)N2或CO2)的入口和出口;注射針入口處無進樣隔墊,但有一停止閥可阻止或允許注射針將樣品注入冷柱頭。進樣時,先把注射針頭插入進樣通道,停在停止閥上部,再開啟停止閥,將針頭插到毛細管柱頭上,快速注射(約0.5uL)樣品,然后將注射針頭提回到停止閥上部,關(guān)上閥門,拔出注射針,立即開始程序升溫分析。

       

      此進樣系統(tǒng)的密封是依據(jù)注射針頭(外徑0.23mm、長80mm)和進樣通道(內(nèi)徑0.3mm)的緊密配合來實現(xiàn)的。

       

      冷柱頭進樣時,柱溫比所用溶劑的沸點低25~30℃,氣化后的溶劑在柱頭處冷凝,此層溶劑形成臨時性液膜固定相,在載氣流的作用下伸展產(chǎn)生溢流區(qū)(圖中A),當溶質(zhì)分布于整個溢流區(qū),會引起進樣譜帶的展寬,為抑制此種現(xiàn)象產(chǎn)生,可使用保留間隙技術(shù)。

       

      保留間隙是一段經(jīng)過去活處理但沒有固定相的毛細管,因此它對任何溶質(zhì)或溶劑都無保留作用,即k'=0。保留間隙的去活試劑應與溶劑的性質(zhì)相近,例如樣品的溶劑是非極性時,則應采用非極性去活試劑(如D4八甲基環(huán)四硅氧烷),以使溶劑與保留間隙表面有很好的潤濕性。通常當進樣1~2uL時,保留間隙長度為0.5~1.0m,溶劑的溢流區(qū)就處于保留間隙柱區(qū),當溶劑蒸發(fā)時,隨載氣向前移動,較易揮發(fā)的組分(k<5)被溶劑聚焦,較難蒸發(fā)的組分保留在色譜柱頭的固定相上聚焦,從而達到克服溶劑溢流造成的譜帶加寬。

       

      保留間隙的作用可總結(jié)為:

      ①通過溶劑聚焦和固定液聚焦使進樣譜帶變窄;

      ②解決溢流區(qū)太長產(chǎn)生峰劈裂問題;

      ③可以作為保護柱使非揮發(fā)性臟組分不進入分析柱;

      ④可作為細口徑毛細管柱與自動柱上進樣器匹配的界面;

      ⑤用作 LC-GC聯(lián)用的界面。

      保留間隙使用很多次后,鈍化層會剝落下來露出表面的吸附點,所以工作中要注意更換新的保留間隙,實際經(jīng)驗是保留間隙約可進樣100次。

       

      冷柱頭進樣的優(yōu)點是消除了寬沸程樣品組成的失真和受熱不穩(wěn)定樣品的吸附與分解;分離的柱效高,靈敏度、準確度和精密度都比較高。缺點是僅適于分析濃度簇0.1%的樣品,對高濃度樣品需稀釋后再進樣,否則引起柱超載;的細長注射針頭操作不當易損壞;長期使用柱頭易被污染;各組分的保留值重復性較差。

       

      冷柱頭進樣遠不及分流進樣、不分流進樣使用得那么普遍,冷柱頭進樣器不是氣相色譜儀的標準配置,是需另購的選件,會增加分析成本。

       

      程序升溫氣化進樣(PTV)

      將氣體或液體樣品注入氣化室處于低溫的內(nèi)襯管后,立即按設定的程序升溫步驟,迅速提高氣化室的溫度,再實現(xiàn)樣品的快速氣化。此種氣化室的結(jié)構(gòu)如圖所示。它的結(jié)構(gòu)特點是:

       

      ①氣化室既有實現(xiàn)快速升溫的程序升溫電熱裝置,又有可使之快速降溫的半導體制冷裝置或可通入制冷劑(液態(tài)N2或CO2)的進、出口通道;

      ②配有分流閥,可實現(xiàn)分流進樣和不分流進樣;

      ③進樣口可采用無隔墊進樣頭,配有的停止閥,也可配備有隔墊的進樣頭。

      由上述結(jié)構(gòu)可看出,它在實現(xiàn)程序升溫氣化進樣的同時,也兼有分流/不分流進樣和冷柱頭進樣的功能,是用于毛細管柱氣相色譜分析的通用進樣器。由于其構(gòu)造復雜,其價格約為分流/不分流進樣器的3倍,為冷柱頭進樣器的1.5倍,因其功能齊全,氣相色譜儀已配備了此種通用進樣器。

      此進樣器具有既可將樣品低溫捕集又可將樣品快速氣化的功能,*消除了寬沸程樣品的進樣失真和分流歧視;可在氣化室實現(xiàn)對樣品的濃縮;使不揮發(fā)物滯留在內(nèi)襯管中,保護了毛細管柱。它具有的進樣操作方式如下:

      ①程序升溫氣化分流進樣,適合于絕大部分樣品分析,當進行方法研究或篩選樣品時,應先使用此種進樣方式。

      ②程序升溫氣化不分流進樣,適合于痕量組分分析,其操作要求和一般不分流進樣相似,僅瞬間不分流時間間隔要長一些,0.5~1.5min,且進樣量可大于一般不分流進樣。

      ③冷柱頭進樣,不啟動程序升溫,適合于受熱易分解樣品的分析。

      ④溶劑消除不分流進樣,可選擇性地除去樣品中的大量溶劑,達到濃縮痕量組分的目的。

       

      進樣時,先關(guān)閉分流閥,控制氣化室溫度稍低于溶劑的沸點,緩慢注入樣品,進樣后立即打開分流閥,可采用大的放空流量(可高達每分鐘幾百毫升),同時以低的程序升溫速率升高氣化室的溫度,加速溶劑的氣化一,待大部分溶劑蒸氣放空后,立即關(guān)閉分流閥,待氣化室達到設定高于柱溫的溫度,可啟動色譜柱程序升溫程序進行樣品分析。此方法的缺點是有部分低沸點組分會隨溶劑一起放空,而使分析獲得的樣品組成失真。

       

      由以上介紹的用于毛細管柱的直接進樣、分流進樣、不分流進樣、冷柱頭進樣和程序升溫氣化進樣五種不同操作方式,可看到影響毛細管柱分離效果的因素遠比填充柱復雜,但也提供了改善分離效果的更多調(diào)節(jié)因素。因此掌握毛細管柱的不同進樣技術(shù),也已成為色譜分析工作者必須掌握的基本功。

       

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